快速高效琼脂糖凝胶DNA
小量回收试剂盒
(离心柱型
试剂盒内容 |
50次 货号cat:FG110 |
200次货号cat:FG120 |
过滤柱 Filter Column |
50 |
200 |
收集管 Collection Tube(2ml) |
50 |
200 |
吸附柱 Spin Column |
50 |
200 |
收集管 Collection Tube(2ml) |
50 |
200 |
溶液PB Buffer PB |
35 ml |
140 ml |
漂洗缓冲液 Wash Buffer |
15 ml |
30 ml×2 |
洗脱缓冲液 Elution Buffer |
15 ml |
15 ml×2 |
说明书 Specification |
1 |
1 |
贮存条件:
室温,有效期一年。
产品简介
※ GalaxyBio公司与由美国公司通力合作,由美方公司提供全方面技术、关键纯化材料,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格上却是国产试剂盒的价位。
※ 无需溶胶,直接过柱粉碎。目的DNA带从凝胶上切下来后,通过离心粉碎,一次溶出,再采用硅胶膜吸附柱吸附,DNA便可用去离子水(或低盐缓冲液)洗脱出。能从各个等级的琼脂糖凝胶中回收到200bp-40kp的DNA带,且回收率达90%,小于200bp片段请用本公司的同类产品小片段回收。
※ 最大吸附量为60ug,实验结果可重复性好。
※ 纯度好, 直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
操作步骤:
1. 试验前准备及注意事项
■请尽量采用浓度<1.5%的琼脂糖凝胶,浓度越小回收效果越好。
■Wash Buffer 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
2. 切胶 将琼脂糖凝胶电泳后的单一目的片段切出(尽量切除多余部分),稍切碎,转入过滤离心管中。
3. 破碎 大于12,000转/分 全速离心5min。速度越大,效果越好。DNA同缓冲液一起溶出到收集管中。
注意:此时可以直接-20℃冻存,也可以进一步过柱纯化,或乙醇沉淀纯化。
4. 吸附 往上述收集管中加入1~5体积的溶液PB (Buffer PB) ,全部转入吸附柱中, 12,000转/分 离心30秒,弃去离心管中液体。
注意:对于几百bp小片段,增大溶液PB (Buffer PB)体积,可以更好回收。
5. 漂洗 将700μl的Wash Buffer加入吸附柱Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。
6. 再漂洗 将500μl的Wash Buffer加入Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。 空柱12000rpm再离心2分钟,除去残留乙醇。
7. 洗脱 将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上,在吸附柱Spin Column膜的中央处加入50-100μl的水或洗脱缓冲液Elution Buffer,室温静置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。
注意:Elution Buffer 组成为1 mM EDTA和2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应。把水或洗脱液加热于60℃使用时有利于提高洗脱液效率,如果提取的质粒>10kb,请将洗脱液预热至65℃,并适当延长洗脱时间。
注意事项: 1. 请尽量采用浓度<1.5%的琼脂糖凝胶,浓度越小回收效果越好。
2. 琼脂糖凝胶要求新配制、刚刚跑过电泳的。电泳缓冲液,也要求新配制的。
3. 如下一步实验要求较高,则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
4. 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
5. 溶液PB为刺激性液体,皮肤等接触后请用大量水冲洗,或直接就医
DNA浓度和纯度检测
OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。
OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
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