小片段DNA小量回收试剂盒
(结合树脂&离心柱型)
试剂盒内容 |
50次
Cat.FR050 |
100次
Cat.FR060 |
结合树脂 Resin |
10 ml |
10mlx2 |
漂洗缓冲液 Wash Buffer |
15 ml |
15 ml x2 |
洗脱缓冲液 Elution Buffer |
15 ml |
15 ml x2 |
吸附柱 Spin Column |
50 |
50 x2 |
收集管 Collection Tube(2ml) |
50 |
50 x2 |
说明书 Specification |
1 |
1 |
贮存条件:
室温,有效期一年。
产品简介
※ 本公司与由美国公司通力合作,由美方提供全方面技术、关键纯化材料,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格上却是国产试剂盒的价位。
※ 能从液体中回收小片段DNA,8bp 的DNA小片段回收率达60%。20-100bp可达80%。
※ 采用进口硅胶膜和吸附树脂,最大吸附量为60ug,实验结果重复性好。
操作步骤:
1. 试验前准备及注意事项
a. Resin 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
b. Wash Buffer 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
2. 吸附 Resin加入乙醇后,剧烈混匀。加7倍体积的Resin乙醇溶液于样品中(7倍于样品),混匀。待液体降至室温,转入吸附柱中, 12,000转/分 离心30秒,弃去离心管中液体。
3. 漂洗 将700μl的Wash Buffer加入吸附柱Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。
4. 再漂洗 将500μl的Wash Buffer加入Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。 空柱12000rpm再离心2分钟,除去残留乙醇。
5. 洗脱 将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上,在吸附柱Spin Column膜的中央处加入50-100μl的灭菌水(pH8.5)或洗脱缓冲液Elution Buffer,室温静置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。
注意:Elution Buffer 组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应..把水或洗脱液加热于60℃使用时有利于提高洗脱液效率,
DNA浓度和纯度检测
OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。
OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
常见问题分析及解决方案
问 题 |
可能原因 |
解决方法 |
未得到DNA片断
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洗脱液Elution Buffer使用不当
漂洗缓冲液 Wash Buffer用前未加无水乙醇
样品起使量少 |
步骤5中,请将洗脱液EB加至吸附柱Matrix的中间部位,以确保完全渗入吸附材料中
请按试剂瓶标签说明在漂洗漂洗缓冲液中加无水乙醇,并做好标记. |
DNA产量低 |
洗脱效率不高 |
使用NAOH将灭菌双蒸水PH调至8.5后再进行洗脱.
建议将洗脱缓冲液用1.5ml离心管分装后使用,以避免被高盐或酸性溶液污染.
结合树脂 Resin没有完全悬起,含量减少。 |
纯化得到的DNA片断不单一 |
PCR引物二聚体片断较大
PCR产物含有非特异性扩增片段 |
改用琼脂糖凝胶回收试剂盒纯化片段. |
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