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      琼脂糖凝胶小片段DNA小量回收试剂盒

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
FR05050tests260元
FR060100tests480元

琼脂糖凝胶小片段DNA小量回收试剂盒

 
琼脂糖凝胶小片段DNA
小量回收试剂盒
         (树脂·离心柱型)
 
 
 

试剂盒内容
50 货号cat:FG030
100次货号cat:FG040
树脂溶胶液    Matrix-Gel-lysis
35 ml
70 ml
漂洗缓冲液    Wash Buffer
15 ml
30 ml
洗脱缓冲液    Elution Buffer
15 ml
15 ml
吸附柱        Spin Column
50
100
收集管   Collection Tube(2ml)  
50
100
说明书     Specification
1
1

 
贮存条件:
室温,有效期一年。
产品简介
     
※  GalaxyBio公司与由美国公司通力合作,由美方公司提供全方面技术、关键纯化材料,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格上却是国产试剂盒的价位。
※  目的DNA带从凝胶上切下来后,通过溶胶液溶胶,树脂吸附柱吸附,DNA便可用去离子水(或低盐缓冲液)洗脱出。能从各个等级的琼脂糖凝胶中回收到20bp-40kp的DNA带,且回收率达85%,在低浓度凝胶可达95%。
※  回收片断范围较广,特别是对于小于100bp的片断,优于硅胶膜。
※  标准量的树脂,最大吸附量为60ug,实验结果可重复性好。
  ※  纯度好, 直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
 
操作步骤:
1. 试验前准备及注意事项
 Wash Buffer 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
2. 切胶  将琼脂糖凝胶电泳后的单一目的片段切出(尽量切除多余部分),放入1.5 ml灭菌离心管中,称其重量。
3. 溶胶 用力振荡树脂溶胶液,使得树脂完全悬浮。加入6倍体积(体积比,0.1 g凝胶视为100 µl),室温放置15分钟、或37℃30分钟、或65℃加热5-10分钟使胶块完全融化。
   注意:应彻底溶解,否则会影响回收效果
4. 吸附 待液体降至室温(温度越低,回收效果越好),充分混悬树脂,全部转入吸附柱中, 12,000转/分 离心30秒,弃去离心管中液体。
 
 
5.  漂洗  将700μl的Wash Buffer加入吸附柱Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。
6.  再漂洗  将500μl的Wash Buffer加入Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。 空柱12000rpm再离心2分钟,除去残留乙醇。
7.  洗脱  将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上,在吸附柱Spin Column膜的中央处加入50-100μl的水或洗脱缓冲液Elution Buffer,室温静置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。
    注意:Elution Buffer 组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应,。把水或洗脱液加热于60℃使用时有利于提高洗脱液效率,如果提取的质粒>10kb,请将洗脱液预热至60℃,并适当延长洗脱时间。
注意事项:
1.电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。
2.如下一步实验要求较高,则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3.切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对DNA造成损伤。
DNA浓度和纯度检测
   OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。
   OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
 
 
 
 
 
 
常见问题分析及解决方案

可能问题
可能原因
建议解决方法
低DNA 产量
加入太少量的溶胶液
错误判断割下的琼脂糖凝胶的体积,按照使用说明加入足够量的溶胶液。
琼脂糖凝胶不能完全溶解于溶胶液
确保水浴温度在50℃以令凝胶完全溶解.
TAE 电泳缓冲液不新鲜
使用新鲜配制的缓冲液,这样不仅可以增加产量,也可防止提取到的DNA 被污染.
柱子堵塞
琼脂糖凝胶没有完全溶解在溶胶液
凝胶薄片(>0.3ml) ,我们建议把胶切成更碎的小块以帮助溶解.
无DNA
漂洗液没有用无水乙醇稀释
按照使用说明来准备好漂洗液.
加入的溶胶液体积不适合
对于<200bp的DNA 片断,加入6 倍体积的溶胶液
OD 值与琼脂糖凝胶中的DNA产量不相符
从柱子上洗脱下来的痕量杂质增加了A260 的值
确保是按照步骤5和6的方法来洗涤柱子.另一方面,还取决于琼脂糖/EB电泳的量.
点样时样品漂出孔外
在洗涤完之后没有把柱上的乙醇完全除去
按步骤7 的说明离心柱子以甩干之,然后再进行下面的洗脱步骤.

 

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