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      EZ-BDC 血液基因组DNA小量快提试剂盒------20分钟快提DNA

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
GM81050480元
GM8202502000元

EZ-BDC 血液基因组DNA小量快提试剂盒------20分钟快提DNA

EZ-BDC
血液基因组DNA小量快提试剂盒

试剂盒内容
50
Cat:GM810
250
Cat: GM820
Miniprep column
50
250
2 ml microfuge tube
50
250
溶液AP1 Buffer AP1
25 ml
130 ml
溶液AP2 Buffer AP2
6 ml
30 ml
溶液W1A Buffer W1A
15 ml
30ml×2
溶液W2 Buffer W2
15 ml
30ml ×2
溶液TE   Buffer TE
10 ml
10 ml×5
说明书     Protocol
1
1

 
贮存条件:
室温,有效期2年。
产品简介:     
※  GalaxyBio 公司与美国公司通力合作,由美方提供全方面技术、关键纯化材料,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格却是国产试剂盒的价位
※  采用独特的细胞裂解和血红素/蛋白沉淀技术,快速、方便,高得率、高纯度。可从100μl-250μl的血液中快速提取12μg高质量的基因组DNA。
  ※  提取的DNA可直接用于PCR/Real time PCR、限制性酶切、Southern blot、测序、mutant analysis和SNP等下游应用实验。
注意事项:
1. 如果从鸟类、两栖类或更低级的动物中提取基因组DNA,因其血液中红细胞有核,血液用量勿超过10μl,并加PBS 溶液将血样体积稀释到250μl后再按正常步骤操作。
2. 制备管可结合多至25μg 的DNA。若需更多的DNA,可用0.5 ml 血来提取基因组DNA。将0.5 ml血样分成两管,每管250μl,按步骤1至4制备提取。将步骤4 所得到的上清混合,加到同一个制备管中结合DNA,最后用100-200μl 的Buffer TE洗脱DNA。
3. Buffer AP1 和Buffer W1A 含刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套和眼镜,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水和生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。
操作步骤:
1.试验前准备及注意事项
 a. 试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在溶液W1A 溶液W2中加入无水乙醇,并做好标记;溶液使用后,避免长期暴露于空气中,用后请及时盖紧盖子,密闭保存。
   
 b. 使用前,请将水浴锅调整至70℃,并将溶液TE置于70℃预热。
2. 加500 μl Buffer AP1 到1.5 ml 离心管中。
3. 加200-250 μl 抗凝全血到Buffer AP1 中,用移液器来回吸注几次,以彻底溶解残留在吸头上的血液。盖紧离心管盖子,旋涡振荡10seconds。
* 必须充分混合或旋涡振荡以确保完全释放基因组DNA。
* 若从凝固的血或干血粉中提取基因组DNA,在研钵中收集凝固的血或干血粉,加入200 μl 含20 mM Tris,10 mMEDTA,(pH 8.5)的缓冲液,快速研磨30 s。加500 μl Buffer AP1,研磨充分后收集溶解产物到1.5 ml 离心管中, 50℃加热1 min。旋涡振荡溶解可能存在的血块,在冰浴中冷却后进入步骤3 的操作。
4. 加100 μl Buffer AP2,旋涡振荡10seconds。12,000×g 离心10 min。
5. 将制备管置于2 ml 离心管中,将步骤4中的上清加入到制备管中,12,000×g 离心1 min。
* 如在制备管中仍残留溶液,适当升高离心速度,再离心一次,使所有溶液过滤到2 ml 离心管中。
6. 弃滤液,将制备管置回到原2 ml 离心管中,加入700 μl Buffer W1A,室温放置2 min12,000×g 离心30seconds。
* 确认在Buffer W1A 中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
* 如在制备管中仍残留溶液,适当升高离心速度,再离心一次,使所有溶液过滤到2 ml 离心管中。
7. 弃滤液,将制备管置回到原2 ml 离心管中,加入800 μl 已加无水乙醇的Buffer W2,12,000×g,离心1 min。
* 确认在Buffer W2 中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
8.(可选方案)将制备管置回到原2 ml 离心管中,加入500 μl Buffer W2 到制备管中,12,000×g,离心1 min。
9. 将弃滤液,将制备管置回原2 ml 离心管,12,000×g 离心1 min。
10.向硅胶膜中央加入80-200µl预热(70℃)Buffer TE,室温静置1 min(放入70℃水浴锅孵育5分钟,能够更好的洗脱),12,000×g 离心1 min 洗脱DNA。更大分子的基因组DNA完全溶解通常需更长时间。提取的基因组DNA可立即进行下游分子实验或-20℃保存
DNA定量及纯度检测
OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
常见问题
 
可能原因
解决方法
未得到DNA
溶液W1A和溶液W2使用前未加入无水乙醇
请按试剂瓶标签说明在溶液W1A和溶液W2中加入无水乙醇,并标记。
DNA产量低
 
 
裂解不完全
加入全血后请立即充分混匀。
确保初始血液用量。
确保旋涡振荡充分。
血液样品中白细胞浓度较低
 
将血液样品4,000rpm室温离心10分钟。离心后样品将分为三层,直接吸取20-50μl中间层作为初始材料进行操作。
初始材料质量不高
使用新鲜或冷冻的血液样品。
洗脱缓冲液使用不当
使用70℃预热的洗脱缓冲液。
柱子堵塞
过滤出去凝血块,
有核细胞多,降低使用血量
酶反应性不好
残留盐分
Buffer W1A和Buffer W2充分洗涤

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