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      超纯质粒DNA小量提取试剂盒-----去内毒素、去蛋白

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
FP05050420元
FP060100680元

超纯质粒DNA小量提取试剂盒-----去内毒素、去蛋白

超纯质粒DNA小量提取试剂盒
            (去内毒素、去蛋白)
 

 试剂盒内容
50次 货号cat:FP050
100次货号cat:FP060
RNaseA (10mg/ml)  
150ul
300ul
溶液S1    Resuspension Buffer
15 ml
30 ml
溶液S2    Lysis Buffer 
15 ml
30 ml
溶液S3    Neutralization Buffer
25 ml
45 ml
去内毒素S4 Buffer S4
25ml
45 ml
漂洗缓冲液 Wash Buffer
15 ml
30 ml
洗脱缓冲液 Elution Buffer
10 ml
20 ml
吸附柱     Spin Column
50
100
收集管   Collection Tube(2ml)  
50
100
说明书     Specification
1
1

 
贮存条件:
室温,有效期一年。溶液S1加入RNase后2-8℃保存
 
产品简介     
※  本试剂盒采用经典的SDS碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅胶膜在高盐低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅胶膜上洗脱。
  ※  具有高效率的内毒素去除液,有效去内毒素,经检测,一次分离即符合国家药典内毒素含量标准。非常适合转染、转化及动物免疫及各种分子生物学实验。
  ※  快速、方便,从1~5 ml大肠杆菌LB(Luria Bertani)培养液中,可快速提取15-40ug纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达85~90%。
操作步骤:
1.试验前准备及注意事项
 a. 溶液S1 Resuspension Buffer 使用前将RNase A全部加入(使用前离心),均匀混合后4℃保存并标示。
     b. Wash Buffer 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
     c. 使用前检查溶液S2,若有请于37℃或微波炉稍加热溶解。S2可以在手握不烫手时使用。
     d. 溶液S2 Lysis Buffer、Buffer S4及洗脱液用后拧紧瓶盖。
     e. 产品具有腐蚀性,注意防护。如接触,请用大量水冲洗并及时就医。
2.  收菌  取1~5ml过夜培养的菌液,12000rpm离心1分钟,弃上清。
注意:一般高拷贝质粒用1-3ml菌液,低拷贝质粒用2-10ml菌液。若使用大体积菌液,请相应加大各溶液的体积。
3.  重悬菌液  将250μl溶液S1 Resuspension Buffer(已加RNase A)加入菌液沉淀,Vortex充分悬浮细菌沉淀。
    注意:请充分重悬细菌,若不充分会导致碱裂解不完全
4.  碱裂解  将250μl溶液S2 Lysis Buffer 加入细菌重悬液,温和地上下翻
 
转混合6~10次,使菌体充分裂解,直至溶液变得清亮。
注意:此步请轻柔混合,剧烈混合如Vortex会导致基因组DNA断裂,从而污染质粒DNA
     碱裂解不宜超过5分钟,否则会导致部分质粒DNA不可逆变性。
5.  中和  加入350μl溶液S3 Neutralization Buffer,立即轻柔地上下翻转混合直至蓝色彻底消失。室温放置5分钟后,室温12000rpm离心10分钟。
6.  去内毒素
a..将上述操作的上清液体转移另一离心管中(忌取到沉淀),加400μl S4,振荡混匀,
b.不时振荡数次每次30秒。
c. 12,000 rpm,30℃离心5 min。
 d. 溶液分为两相。上层水相含DNA,下层油状相含内毒素。
e.将含DNA的上层水相转移到吸附柱Spin Column中,弃层油状相。宁肯少提上层水相,也不要不要吸到中间层。一般一次抽提就可以符合标准;也可以根据需要重复抽提2次,即重复步骤a-d两次。
7.  柱结合 12000rpm室温离心1分钟,弃滤液。
9.  漂洗  将700μl的Wash Buffer加入吸附柱Spin Column中,12000rpm室温离心30-60秒,弃滤液。
10. 再漂洗  将700μl的Wash Buffer加入Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。 空柱12000rpm再室温离心2分钟,除去残留乙醇。
11. 洗脱  将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上,在吸附柱Spin Column树脂沉淀中央处加入50-100μl的水或洗脱缓冲液Elution Buffer,室温静置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。
    注意:Elution Buffer 组成为2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应,或以PH8.5的去离子水代替。把水或洗脱液加热于60使用时有利于提高洗脱液效率,如果提取的质粒>10kb,请将洗脱液预热至60,并适当延长洗脱时间。
质粒DNA浓度和纯度检测
   OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。
   OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
   

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