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      质粒DNA小量提取试剂盒

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
FP01050180元
FP020100320元

质粒DNA小量提取试剂盒

 
质粒DNA小量提取试剂盒
              (离心柱型)
 
 试剂盒内容
4次
Cat:FP015
50次
Cat:FP010
100次
Cat:FP020
RNaseA (10mg/ml)  
30ul
150ul
300ul
溶液S1    Resuspension Buffer
1.5ml
15 ml
30 ml
溶液S2    Lysis Buffer 
1.5ml
15 ml
30 ml
溶液S3    Neutralization Buffer
1.8ml
25 ml
45 ml
漂洗缓冲液 Wash Buffer
1.5ml
15 ml
30 ml
洗脱缓冲液 Elution Buffer
1 ml
15 ml
15 ml
吸附柱     Spin Column
4
50
100
收集管   Collection Tube(2ml)  
4
50
100
说明书     Specification
1
1
1
 
贮存条件:
室温,有效期一年。溶液S1加入RNase后2-8℃保存
 
产品简介     
※  本试剂盒采用经典的SDS碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅胶膜在高盐低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅胶膜上洗脱。
※  采用进口硅胶膜,吸附量大,产率高,实验结果可重复性好。
※  溶液中添加了进口作用指示剂,使每一步作用程度一目了然。
  ※  快速、方便,从1~5 ml大肠杆菌LB(Luria Bertani)培养液中,可快速提取15-40 ug纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达85~90%。
  ※  获得的质粒产量高,超螺旋比例高、纯度好。 直接可以用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
操作步骤:
1.试验前准备及注意事项
 a. 溶液S1 Resuspension Buffer 使用前将RNase A全部加入(使用前离心),均匀混合后4℃保存并标示。
 b. 漂洗缓冲液 Wash Buffer 使用前请按标签加入无水乙醇并标示。
     c. 使用前检查溶液S2,若有请于37℃或微波炉稍加热溶解。S2可以在手握不烫手时使用。
     d. 溶液S2 Lysis Buffer及洗脱液用后拧紧瓶盖。
2. 收菌  取1~5ml过夜培养的菌液,12000rpm离心1分钟,尽弃上清。
    注意:一般高拷贝质粒用1-3ml菌液,低拷贝质粒用2-10ml菌液。若使用大体积菌液,请相应加大各溶液的体积。
3.  重悬菌液  将250ul溶液S1 Resuspension Buffer (已加RNase A)加入菌液沉淀,Vortex充分悬浮细菌沉淀。
注意:请充分重悬细菌,若不充分会导致碱裂解不完全
4.  碱裂解  将250ul溶液S2 Lysis Buffer 加入细菌重悬液,温和地上下翻转混合6~10次,使菌体充分裂解,直至溶液变得清亮。
    注意:此步请轻柔混合,剧烈混合如Vortex会导致基因组DNA断裂,从而污染质粒DNA
          碱裂解不宜超过5分钟,否则会导致部分质粒DNA不可逆变性。
5.  中和  加入350ul溶液S3 Neutralization Buffer,立即轻柔地上下翻转混合直至蓝色彻底消失。室温放置5分钟。室温12000rpm离心10分钟。
6.  柱结合  将上述操作的上清液转移至吸附柱Spin Column中,13000rpm离心1分钟,弃滤液。
8.  漂洗  将700μl的漂洗缓冲液 Wash Buffer加入吸附柱Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。
9.  再漂洗  将700μl的漂洗缓冲液 Wash Buffer加入Spin Column中,12000rpm离心30-60秒,弃滤液。 空柱12000rpm再离心2分钟,除去残留乙醇。
10.  洗脱  将Spin Column按置于新的洁净的1.5ml的离心管上,在吸附柱Spin Column膜的中央处加入30-100μl的PH8.5灭菌水或洗脱缓冲液Elution Buffer,室温静置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱DNA,可立即用于下游分子生物学实验或-20℃保存。
    注意:洗脱缓冲液 Elution Buffer组成为10mM Tris-HCI (pH8.5),不影响测序和酶切反应;可以pH8.5灭菌水替代;也可以含有1 mM EDTABuffer TE Buffer洗脱,有助于稳定DNA.洗脱液加热60使用时有利于提高洗脱液效率,如果提取的质粒>10kb,请将洗脱液预热至60,并适当延长洗脱时间。
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
质粒DNA浓度和纯度检测
   OD260值为1,相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。
   OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8,如果洗脱时不使用缓冲液,而使用去离子水,由于受PH值和离子浓度的影响,比值会偏低。
 
常见问题分析及解决方案
可能出现的问题
可能原因
建议解决方法
 
 
 
 
 
DNA产量低
 
 
细胞裂解率低
1.   在加入溶液S1后菌泥没有充分混匀,可漩渦振荡悬浮液使之充分混匀。
2.   加入溶液S2后,延长孵育时间可获得清晰的裂解液。
3.   如果溶液S2没有盖紧,可能需要重配.可按以下准备:0.2N NaOH,1%SDS.
细菌培养物生长过度或不新鲜
不要于37℃培养超过16小时,分离质粒前长时间存放培养物是不利的.
没有DNA被洗脱
出来
没有用乙醇稀释漂洗液
按前面指导的方法准备漂洗液。
产量中有大分子量的DNA污染
加入溶液S2后过分混和细胞裂解液
加入溶液S2后不要猛烈振荡或搖匀,可轻轻颠倒离心管几次使充分混匀
在琼脂糖凝胶上点样时,质粒漂出点样孔
乙醇没有完全从柱子上去除
在操作过程中的确保完全离心甩干离心吸附柱柱。
 
 
 
 
 
 

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