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      R-RVC 病毒总RNA快提试剂盒

GalaxyBio Code包装规格价格说明书购物车
RN15050680元
RN1602502800元

R-RVC 病毒总RNA快提试剂盒

R-RVC
病毒总RNA提试剂盒
试剂盒内容
50
Cat:RN150
250
Cat: RN160
Miniprep column
50
50×5
2 ml microfuge tube
50
50×5
溶液RN1 Buffer RN1
25 ml
25 ml×5
溶液RN2  Buffer RN2
15 ml
15 ml×5
RNA Carrier
350ul ml
350ul×5
溶液RW1 Buffer RW1
15 ml
15 ml×5
溶液RW2  Buffer RW2
15 ml
15 ml×5
溶液TE   Buffer TE
10 ml
10 ml×3
说明书     Protocol
1
1
 
贮存条件:
RNA Carrier -20℃保存,其他室温或4℃,有效期2年。
产品简介:     
※  GalaxyBio 公司与美国公司通力合作,由美方提供全方面技术、关键纯化材料,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格上却是国产试剂盒的价位
※  采用独特的组织细胞裂解沉淀技术,快速、方便,高得率、高纯度。
  ※  提取的RNA分子完整、纯度高,适用于Northern Blot 、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、RNase保护测定、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
注意事项:
1. 所有试剂用DEPC处理过的溶剂配制。请选用RNase-free枪头和离心管,以避免提取过程中RNA被RNase降解。
2. 试剂含刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套和眼镜,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水和生理盐水冲洗,必要时寻求医疗咨询。
3.试验中需要异丙醇和乙醇,请提前准备RNase-free的异丙醇和乙醇。
操作步骤:
1.试验前准备及注意事项
试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在溶液RW1 溶液RW2中加入无水乙醇,并做好标记;溶液使用后,避免长期暴露于空气中,用后请及时盖紧盖子,密闭保存。
2.样品处理
1)液体标本: 血清、血浆、脑脊髓液、分泌液、唾液、腹水、液体粪便、其他分泌物等,12,000×g离心5min,取上清约300ul体积的样品,加入400 μl Buffer RN1,再加入300 μl Buffer RN2用吸头抽吸,混合均匀,
冰浴5 min。(样品较少时,Buffer RN1和RN2按比例同时缩小;也可同时增大) 。
 
2)液体标本浓缩处理:适合病毒拷贝少的标本
取适当体积的液体标本,加入同体积的异丙醇,12,000×g离心10 min,尽量弃去上清。加入400μl Buffer RN1,用吸头抽吸,混合均匀,冰浴5 min。
3)眼、鼻、喉等拭样:
   a.将拭样转移到离心管中,加入2 ml PBS (或生理盐水,用户自备),4℃浸泡2~5h;
b.入同体积的异丙醇,12,000×g离心10 min,尽量弃去上清
c.入400μl Buffer RN1,用吸头抽吸,混合均匀, 冰浴5 min.
4)从培养贴壁细胞中提取病毒RNA:尽量倒掉培养上清后,不须消化,直接加入Buffer RN1体积按10cm2/ml比例加入。
5)从悬浮细胞中提取病毒RNA:可直接离心收集细胞,每400ul Buffer RN1可裂解5×106动物、植物或酵母细胞,或107细菌细胞
3. 12,000×g 离心10 min。
* 4℃条件下离心。
4. 取上清至1.5 ml离心管中,每140ul加入1ul RNA Carrier 。加入0.6体积的异丙醇(或加入1体积无水乙醇),混合均匀。
步骤5-9可选择硅胶膜吸附法离心沉淀法:
* 硅胶膜吸附法与离心沉淀法相比,前者更纯净,而后者提取量大,如病毒拷贝较少时,可采用后者。
A. 硅胶膜吸附法
5A. 将制备管置于2 ml (试剂盒内提供) 离心管中,转移步骤4中的混合液到制备管中,6,000×g离心1min。
* 4℃条件下离心。
6A. 弃滤液,将制备管弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入700 μl Buffer RW1,12,000×g离心1 min。
* 确认在Buffer中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
7A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,在制备管中加入700 μl Buffer RW2,12,000×g离心1 min;以同样的方法再用700 μl Buffer RW2洗涤一次。
* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
8A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,12,000×g离心1 min。
9A. 将制备管放入干净RNase-free的1.5 ml离心管中,在制备管膜中央加60-100 μl Buffer RTE (DNase﹠RNase-free) 。室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA
B. 离心沉淀法
5B. 12,000×g离心10 min,尽量弃去上清。
6B. 加入700 μl Buffer RW1,2,000×g离心5 min。
* 确认在Buffer Buffer RW1中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
7B. 弃去管中溶液,加入700 μl Buffer RW2;2,000×g离心5 min。
* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
8B. 弃去管中溶液,自然干燥。
9B. 加入10-50 μlBuffer TE (DNase﹠RNase-free) ,溶解RNA。
 
 
 
 
 
RNA定量及纯度检测
总RNA 的定量和定性分析: 所有标本均经紫外分光光度仪检测所提取总RNA 的浓度及纯度,OD260/OD280 的值为1.7~ 2.0。

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