二、填料特性：

 

1.单克隆抗体处理：先用磷酸盐或碳酸盐缓冲液，透析或脱盐处理，彻底除带

 

有氨基的小分子或带有-OH的小分子（如甘油类）。

2 用天平称量需要的活化填料0.1g ( 0.1g干的活化的填料经完全溶胀为0.75～1.2ml) ，加入2ml pH9.5，0.25M 碳酸钠缓冲液中。再加入抗体3～6mg（这个可以根据需要增减，抗体越多偶联效果越好）。

3 在摇床上振荡， 25 ℃ 偶联6小时（可以延长到12小时，并同时加上10～30%DMSO稳定抗体活性）；

4 然后加10mg甘氨酸，再反应6个小时封闭剩余的基团。

5 偶联了抗体的填料可以装在柱子中，然后用1MNaCI 溶液洗10个柱床体积，将填料在 20 ％甘油溶液中4℃保存，可以根据需要加入防腐剂。如果是大量的偶联，可以选择G3砂心漏斗或者滤器上按上面的方法清洗，用20倍填料体积，分3～5次清洗。

备注：该偶联方法可用于偶联单抗及其它蛋白，均能获得很好的偶联效果。偶联的物质如果是小分子的例如氨基酸或其他带-NH2 、–SH、-OH 等基团的小分子配基，可以直接把配基加到 0 .05M NaOH 中配置成10～20mg的溶液，其他条件不变。也可以提高偶联的温度，这样可以偶联密度更高。

 

环氧活化的填料的应用注意事项：

1.活化的填料现取现用，免时间过长造成偶联活性降低。其余的可以密封干燥-20℃密封保存，可以保存3年。如果要偶联的蛋白不稳定，可在摇床上4℃振摇偶联 12～16小时，以维持配基的活性。如果没有把握可以配相应浓度的配基溶液0.5～lml，分别选择不同 pH 及温度然后不加填料模拟偶联条件，到时间观察溶液是否有沉淀，如果有沉淀偶联效果就不好，这时可以稍微降低 pH 或温度，同时可以加10％左右的DMSO,，避免沉淀，总之对于任何配基最好能了解其溶解性及稳定性，避免实验失败导致损失。

2.偶联配基后尽快清洗填料，避免在高 pH 条件中，配基失活。

3.更稳定的配基可以直接溶解NaOH 溶液或者碳酸钠溶液中进行偶联，温度可适当提高，偶联时间则相应缩短至1～4 小时。

4.偶联蛋白的最适pH 为可以在 8.0～10 左右，在室温或 4℃ 均可，温度与 pH 的提高均能增加配基的吸附载量，根据蛋白的稳定选择合适的 pH 和温度，偶联蛋白溶液的浓度为 5～20mg / m1。填料体积和配基溶液的体积为 1 : 1.5 或者1:2 。

 

5.偶联的缓冲液包括碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但绝对不能使用 TriS 、甘氨酸等含有氨基和-OH的物质。

6 .在偶联中可以用磁力搅拌器或者别的机械搅拌，但是需要速度慢些，避免填料破碎影响流速，只要把填料能混匀完全悬浮起来即可，避免剧烈搅拌使填料有小颗粒降低流速。如果装柱流速慢可以把浮在上面的小颗粒吸去以保证流速。

更详细可以咨询公司技术支持。