DNAzol
-----组织细胞基因组DNA快提试剂
简介：
DNAzol 是一种完全的、可直接使用的基因组DNA 提取试剂，简单高效，结果可靠，可快速提取基因组DNA，适用于多种样品，大量或少量样品都可使用。DNAzol 可在一个步骤中裂解细胞并水解RNA，经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。整个过程只需10－30 分钟，DNA 回收率可达70－100％，得到的DNA 不需再纯化，可直接用于Southern 杂交、点杂交、分子克隆、PCR 反应和其他分子生物学应用。
保存：
DNAzol 可在4℃保存1 年以上。
操作方法：
1． 裂解，匀浆。
a. 组织：25-50mg 组织加1ml DNAzol ，使用匀浆仪处理5－10 次。少量（5－10mg）柔软组织，如脾或脑组织，可使用微量取样器吹打混匀，室温放置5－10 分钟。
b. 细胞：单层培养的细胞应直接裂解，倒出培养基，加入DNAzol 用取样器吹打几次混匀。每10cm2 细胞培养板加0.75－1.0mlDNAzol。
c. 细胞沉淀或悬浮液：每107 细胞（体积小于0.1ml）加1ml DNAzol，反复吹打混匀。
d. 全血250ul加入0.5 ml DNAzol，震荡混匀。
2． 离心
4－25℃，10000g 离心10 分钟。将得到的上清转入新管。此步骤去除组织碎片、部分水解的RNA 和多糖。
3． 沉淀
每使用1ml DNAzol 加0.5ml 100%乙醇，颠倒离心管5－8 次，混匀样品，室温放置1－3分钟。可以看见DNA 絮状沉淀，用枪头搅绕DNA，贴着管壁将DNA 转移到一个新的离心管中，倒置离心管1 分钟，去除裂解液。降解的DNA 和量少的DNA(少于15ug)无法缠绕到枪头上，可在4－25℃，5000g 离心5分钟取沉淀。
4． 漂洗
用0.8-1ml 75％乙醇漂洗DNA 两次。漂洗时，将DNA 悬浮在乙醇中，颠倒离心管3－6 次，然后静置0.5－1 分钟使DNA 沉降到管底，吸出乙醇。如果需要，可在4－25℃，1000g 离心1－2 分钟沉淀DNA。从组织中提取DNA 时，如需去除其他内含物，第一次漂洗可用70％DNAzol 和30％乙醇的溶液代替75％乙醇。
5． 溶解
用枪吸去残余的酒精，用8mMNaOH或水溶解DNA。用碱可更快速且彻底的溶解。通常，从107 细胞或10－20mg 动物组织中提取的DNA 。可用0.2－0.3ml 8mM NaOH 或水溶解，使DNA 浓度约为0.2－0.3ug/ul。
结果检测
紫外分光光度计检测A260/A280，A260 为1 相当于50ug 双链DNA/ml。得到的A260/A280应为1.6－1.9，片段大小为20－100kb。得到的DNA 片段大小取决于提取过程中机械外力对DNA 的破坏程度。
注意：DNAzol 有毒害性，应避免直接接触皮肤和眼睛。
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