■适用范围:
适用于组织裂解液、血清、血浆等总蛋白的测定。
■双缩脲法的优点:
(1)线形范围较宽,线性范围为1.7mg/ml~140mg/ml。适合蛋白含量较多的样品。
(2)测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5分钟左右。
(3)干扰物质少,并且大多可以避免。
(4)双缩脲显色反应仅和蛋白质中肽键数成正比关系,与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的组成无明显关系,各种蛋白质的显色程度基本相同。
(5)本法重复性好,RCV为4%,CCV为3.9%;
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■测定原理
蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH-CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似,故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰,吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系,经与同样处理的蛋白质标准液比较,即可求得蛋白质含量。
■注意:
(1)本方法灵敏度较低,灵敏性1.7mg/ml,较其它方法较低。
(2)蛋白含量较少的标本,请选用本公司的Bradford或BCA法。
(3)干扰物质非常少,并且大多可以避免。
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