EZ-MMC
口腔粘膜基因组DNA快提试剂盒
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试剂盒内容 |
50次
Cat：GM910 |
250次
Cat: GM920 |
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Miniprep column |
50 |
250 |
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2 ml microfuge tube |
50 |
250 |
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溶液AP1 Buffer AP1 |
25 ml |
130 ml |
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溶液AP2 Buffer AP2 |
6 ml |
30 ml |
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溶液W1A Buffer W1A |
15 ml |
30ml×2 |
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溶液W2 Buffer W2 |
15 ml |
30ml ×2 |
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溶液TE Buffer TE |
10 ml |
10 ml×5 |
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说明书 Protocol |
1 |
1 |
贮存条件：
室温，有效期2年。
产品简介：
※ GalaxyBio 公司与美国公司通力合作，由美方提供全方面技术、关键纯化材料，将核酸纯化等系列产品，在国内推广，实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关，已达到进口产品的品质，而价格上却是国产试剂盒的价位
※ 腔粘膜细胞容易获取，避免了损伤性抽血取样。通过一种快速、安全的技术，用于广泛的基因分析。
※ 采用独特的细胞裂解/蛋白沉淀技术，快速、方便，高得率、高纯度。
※ 可用于后续PCR扩增分析、临床遗传鉴定、单核苷酸多态性分析（SNP）等操作。
用户自备
医用无菌棉签：用于刮落口腔粘膜细胞
生理盐水：用于获取口腔脱落细胞
15毫升离心管：用于离心细胞
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
50毫升锥形离心管：用于漱口收集的容器
台式离心机：用于沉淀口腔细胞
微型台式离心机：用于沉淀细胞和核酸
涡旋震荡仪：用于混匀反应物
注意事项:
Buffer AP1 和Buffer W1A 含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水和生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
操作步骤：
1.试验前准备及注意事项
a. 试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在溶液W1A 和溶液
W2中加入无水乙醇，并做好标记；溶液使用后，避免长期暴露于空气中，用后请及时盖紧盖子,密闭保存。
b. 使用前，请将水浴锅调整至70℃，并将溶液TE置于70℃预热。
2.样品准备
方案一：棉签法（SWAB）
a.加入10ml生理盐水到15ml锥形离心管
b.使用新鲜的医用无菌棉签旋转用力刮搽口腔左右内侧粘膜1分钟
c.浸入到装有10ml生理盐水的锥形离心管中，强力反复搅动30秒。
e.在离心管内挤压医用无菌棉签上的液体
f.重复实验步骤b→e,1或2次
g.放进台式离心机离心10分钟，速度为3000g
j.小心移去上清液，250ul 生理盐水重悬
方案二：漱口法（MOUTHWASH）
a. 喝上50毫升生理盐水或瓶装饮用水
b. 用力漱口5分钟
c. 吐回到50毫升锥形离心管
d. 放进台式离心机离心10分钟，速度为3000g
e. 小心移去上清液,250ul 生理盐水重悬，
3．转移1.5ml离心管，加500μl Buffer AP1。
4．盖紧离心管盖子，旋涡振荡1min。
5．加100 μl Buffer AP2,旋涡振荡10s。12,000×g 离心10 min。
6．将制备管置于2 ml 离心管中，将步骤5中的上清加入到制备管中，12,000×g 离心1 min。
7．弃滤液，将制备管置回到原2 ml 离心管中，加入700 μl Buffer W1A，室温放置2 min12,000×g 离心30 s。
* 确认在Buffer W1A 中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
* 如在制备管中仍残留溶液，适当升高离心速度，再离心一次，使所有溶液过滤到2 ml 离心管中。
8. 弃滤液，将制备管置回到原2 ml 离心管中，加入700 μl 已加无水乙醇的Buffer W2，12,000×g,离心1 min。
* 确认在Buffer W2 中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
9. 将弃滤液，将制备管置回原2 ml 离心管，12,000×g 离心1 min。
10.向硅胶膜中央加入80-200µl预热（70℃）Buffer TE，室温静置1 min（放入70℃水浴锅孵育5分钟，能够更好的洗脱），12,000×g 离心1 min 洗脱DNA。更大分子的基因组DNA完全溶解通常需更长时间。提取的基因组DNA可立即进行下游分子实验或-20℃保存
DNA定量及纯度检测
OD260值为1，相当于50ug/ml的双链DNA。也可以通过DNA Marker通过琼脂糖凝胶电泳半定量。OD260/ OD280比值一般为1.7-1.8，如果洗脱时不使用缓冲液，而使用去离子水，由于受PH值和离子浓度的影响，比值会偏低。
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